Description
Pierce BCA Protein Assay Kit est un test protéique à deux composants, de haute précision et compatible avec les détergents pour la détermination de la concentration en protéines. Les réactifs de Pierce BCA fournissent une détermination précise de la concentration en protéines avec la plupart des types d’échantillons rencontrés dans la recherche sur les protéines. Le test Pierce BCA peut être utilisé pour évaluer les rendements dans les lysats de cellules entières, les fractions de colonne d’affinité, les échantillons de protéines purifiées, ainsi que pour surveiller la contamination des protéines dans des applications industrielles., Comparé à la plupart des méthodes de liaison aux colorants, le test BCA est beaucoup moins affecté par les différences de composition des protéines, offrant une plus grande précision de concentration.,-méthodes de liaison (Bradford)
• Compatibilité—non affectée par les concentrations typiques de la plupart des détergents ioniques et non ioniques
• temps de dosage-incubation de 30 min; beaucoup plus facile et quatre fois plus rapide que les méthodes Lowry classiques
• plage de dosage—plage de travail linéaire pour BSA de 20 à 2000 µg/mL
• sensibilité-détecter jusqu’à 5 µg/mL CU1+ par la protéine dans un milieu alcalin avec la détection colorimétrique très sensible et sélective du cation cuivreux (CU1+) par l’acide bicinchoninique (BCA)., La première étape est la chélation du cuivre avec des protéines dans un environnement alcalin pour former un complexe bleu clair. Dans cette réaction, connue sous le nom de réaction de biuret, les peptides contenant trois résidus d’acides aminés ou plus forment un complexe chélate coloré avec des ions cuivriques dans un environnement alcalin contenant du tartrate de sodium et de potassium.
dans la deuxième étape de la réaction de développement de la couleur, BCA réagit avec le cation réduit (cuivreux) qui s’est formé à la première étape. Le produit de réaction de couleur pourpre intense résulte de la chélation de deux molécules de BCA avec un ion cuivreux., Le complexe BCA/cuivre est soluble dans l’eau et présente une forte absorbance linéaire à 562 nm avec des concentrations de protéines croissantes. Le complexe est environ 100 fois plus sensible (limite inférieure de détection) que la couleur bleu pâle de la première réaction.
la réaction est fortement influencée par quatre résidus d’acides aminés (cystéine, cystine, tyrosine et tryptophane) dans la séquence d’acides aminés de la protéine., Cependant, contrairement aux méthodes de liaison aux colorants de Coomassie, l’épine dorsale peptidique universelle contribue également à la formation de la couleur, aidant à minimiser la variabilité causée par les différences de composition des protéines.