Descrizione
Pierce BCA Protein Assay Kit è un dosaggio proteico bicomponente, ad alta precisione, compatibile con detergenti per la determinazione della concentrazione proteica. I reagenti Pierce BCA forniscono una determinazione accurata della concentrazione proteica con la maggior parte dei tipi di campioni riscontrati nella ricerca proteica. Il saggio Pierce BCA può essere utilizzato per valutare le rese in lisati a cellule intere, frazioni di colonna di affinità, campioni di proteine purificate, nonché per monitorare la contaminazione proteica in applicazioni industriali., Rispetto alla maggior parte dei metodi di legame del colorante, il test BCA è influenzato molto meno dalle differenze compositive delle proteine, fornendo una maggiore precisione di concentrazione.,-metodi di rilegatura (Bradford)
• la Compatibilità non è influenzato da concentrazioni tipiche della maggior parte ionici e non ionici detergenti
• tempo di Dosaggio—30 min di incubazione; molto più facile e quattro volte più veloce rispetto ai classici Lowry metodi
• Dosaggio gamma lineare di campo di lavoro per BSA 20 a 2000 µg/mL
• la Sensibilità di rilevamento fino a 5 µg/mL con una maggiore protocollo
Come il test funziona
BCA Protein Assay combina la ben nota riduzione di Cu2+ a Cu 1+ dalla proteina in un ambiente alcalino altamente sensibile e selettivo rilevazione colorimetrica di rameosa catione (Cu1+) da bicinchoninic acido (BCA)., Il primo passo è la chelazione del rame con proteine in un ambiente alcalino per formare un complesso azzurro. In questa reazione, nota come reazione di biureto, i peptidi contenenti tre o più residui di amminoacidi formano un complesso chelato colorato con ioni rameici in un ambiente alcalino contenente tartrato di sodio e potassio.
Nella seconda fase della reazione di sviluppo del colore, BCA reagisce con il catione ridotto (ramoso) che si è formato nel primo passaggio. Il prodotto di reazione di colore viola intenso deriva dalla chelazione di due molecole di BCA con uno ion rameoso., Il complesso BCA / rame è solubile in acqua e presenta una forte assorbanza lineare a 562 nm con concentrazioni proteiche crescenti. Il complesso è circa 100 volte più sensibile (limite inferiore di rilevamento) rispetto al colore blu pallido della prima reazione.
La reazione è fortemente influenzata da quattro residui aminoacidici (cisteina, cistina, tirosina e triptofano) nella sequenza aminoacidica della proteina., Tuttavia, a differenza dei metodi di legame del colorante di Coomassie, la spina dorsale peptidica universale contribuisce anche alla formazione del colore, contribuendo a ridurre al minimo la variabilità causata dalle differenze compositive delle proteine.