opis
Pierce BCA Protein Assay Kit jest dwuskładnikowym, precyzyjnym, kompatybilnym z detergentami testem białkowym do oznaczania stężenia białka. Odczynniki Pierce BCA zapewniają dokładne określenie stężenia białka w większości typów próbek spotykanych w badaniach nad białkami. Test Pierce BCA może być stosowany do oceny plonów w lizatach całych komórek, frakcjach affinity-column, oczyszczonych próbkach białek, a także do monitorowania zanieczyszczenia białkami w zastosowaniach przemysłowych., W porównaniu do większości metod wiązania barwników, test BCA ma znacznie mniejszy wpływ na różnice w składzie białek, zapewniając większą dokładność koncentracji.,-metody wiązania (Bradford)
• kompatybilność—nie ma wpływu na typowe stężenia większości jonowych i niejonowych detergentów
• czas testu-30—min inkubacja; znacznie łatwiejsze i cztery razy szybsze niż klasyczne metody Lowry ' ego
• zakres testu-liniowy zakres roboczy dla BSA od 20 do 2000 µg/mL
• czułość—Wykrywanie do 5 µg/mL z ulepszonym protokołem
Jak działa test
Test białka BCA łączy dobrze znaną redukcję Cu2+ do Cu1+ przez białko w środowisku alkalicznym z bardzo czułym i selektywnym kolorymetrycznym wykrywaniem kationu miedziowego (CU1+) za pomocą kwasu bicynchonicznego (BCA)., Pierwszym krokiem jest chelatacja miedzi z białkiem w środowisku alkalicznym w celu utworzenia jasnoniebieskiego kompleksu. W reakcji tej, znanej jako reakcja biureta, peptydy zawierające trzy lub więcej reszt aminokwasowych tworzą barwny kompleks chelatowy z jonami Miedziowymi w środowisku zasadowym zawierającym winian potasu sodu.
w drugim etapie reakcji rozwoju koloru BCA reaguje z kationem zredukowanym (miedziowym), który powstał w pierwszym etapie. Intensywny purpurowy produkt reakcji wynika z chelatacji dwóch cząsteczek BCA jednym Jonem miedziowym., Kompleks BCA / miedź jest rozpuszczalny w wodzie i wykazuje silną absorbancję liniową przy 562 nm ze wzrostem stężenia białka. Kompleks jest około 100 razy bardziej wrażliwy (dolna granica wykrywalności) niż bladoniebieski kolor pierwszej reakcji.
na reakcję silnie wpływają cztery reszty aminokwasowe (cysteina, cystyna, tyrozyna i tryptofan )w sekwencji aminokwasowej białka., Jednak w przeciwieństwie do metod wiązania barwnika coomassie, uniwersalny kręgosłup peptydowy przyczynia się również do tworzenia kolorów, pomagając zminimalizować zmienność spowodowaną różnicami w składzie białek.