descriere
Pierce BCA Protein Assay Kit este un test de proteine bicomponent, de înaltă precizie, compatibil cu detergenții pentru determinarea concentrației de proteine. Reactivii Pierce BCA asigură determinarea exactă a concentrației de proteine cu majoritatea tipurilor de probe întâlnite în cercetarea proteinelor. Testul Pierce BCA poate fi utilizat pentru a evalua randamentele în lizați de celule întregi, fracțiuni de coloană de afinitate, probe de proteine purificate, precum și pentru a monitoriza contaminarea proteinelor în aplicații industriale., În comparație cu majoritatea metodelor de legare a coloranților, testul BCA este afectat mult mai puțin de diferențele de compoziție ale proteinelor, oferind o precizie mai mare a concentrației.,-metodele de legare (Bradford)
• Compatibilitate—afectate de concentrațiile tipice de cele mai multe ionic și detergenți neionici
• Testul timp de 30 de minute de incubare; mult mai ușor și de patru ori mai repede decat cele clasice Lowry metode
• Testul gama—linear de acțiune pentru BSA de 20 de 2000 µg/mL
• Sensibilitate—detecta până la 5 µg/mL cu enhanced protocol
Cum testului funcționează
BCA Proteine Testul combină bine-cunoscut de reducere a Cu2+ la Cu1+ de proteine într-un mediu alcalin cu foarte sensibil si selectiv colorimetrice de detectare a cupros, precum cationi (Cu1+) de bicinchoninic acid (BCA)., Primul pas este chelarea cuprului cu proteine într-un mediu alcalin pentru a forma un complex Albastru deschis. În această reacție, cunoscută sub numele de reacția biuret, peptidele care conțin trei sau mai multe reziduuri de aminoacizi formează un complex chelat colorat cu ioni cuprici într-un mediu alcalin care conține tartrat de sodiu de potasiu.
în a doua etapă a reacției de dezvoltare a culorii, BCA reacționează cu cationul redus (cupros) care a fost format în primul pas. Produsul intens de reacție de culoare Violet rezultă din chelarea a două molecule de BCA cu un singur Ion cupros., Complexul BCA / cupru este solubil în apă și prezintă o absorbție liniară puternică la 562 nm cu creșterea concentrațiilor de proteine. Complexul este de aproximativ 100 de ori mai sensibil (limita inferioară de detectare) decât culoarea albastru pal a primei reacții.
reacția este puternic influențată de patru reziduuri de aminoacizi (cisteină, cistină, tirozină și triptofan) în secvența de aminoacizi a proteinei., Cu toate acestea, spre deosebire de metodele de legare a coloranților Coomassie, coloana vertebrală peptidică universală contribuie, de asemenea, la formarea culorii, ajutând la minimizarea variabilității cauzate de diferențele de compoziție a proteinelor.