Popis
Pierce BCA Protein Assay Kit je dvousložková, vysoce přesné, pracího prostředku-kompatibilní protein assay pro stanovení koncentrace proteinu. Pierce BCA činidla poskytují přesné stanovení koncentrace bílkovin u většiny typů vzorků, se kterými se setkáváme ve výzkumu bílkovin. Test Pierce BCA lze použít k posouzení výnosů v celých buněčných lyzátech, frakcích afinity, vzorcích purifikovaných proteinů a ke sledování kontaminace bílkovin v průmyslových aplikacích., Ve srovnání s většinou metod vázání barviva je test BCA ovlivněn mnohem méně rozdíly v složení bílkovin, což poskytuje větší přesnost koncentrace.,-závazné metody (Bradford)
• Kompatibilita—ovlivněna typické koncentrace většiny iontové a neiontové detergenty
• Test čas—30 min inkubace; mnohem jednodušší a čtyřikrát rychlejší než klasické Lowryho metody
• Test rozsah—lineární pracovní rozsah pro BSA 20 až 2000 µg/mL
• Citlivost—detekce až 5 µg/mL, se zvýšenou protokol
Jak test funguje
BCA Protein Assay kombinuje dobře známé redukci Cu2+ na Cu1+ proteinem v alkalickém prostředí s vysoce citlivou a selektivní kolorimetrická detekce extrahovaná kation (Cu1+) pomocí bicinchoninic acid (BCA)., Prvním krokem je chelatace mědi s proteinem v alkalickém prostředí za vzniku světle modrého komplexu. V této reakce, známý jako biuretové reakce, peptidy obsahující tři nebo více aminokyselinových zbytků tvoří barevný chelát komplexu s měďnatými ionty v alkalickém prostředí s obsahem sodíku a draslíku-tartarát.
ve druhém kroku reakce vývoje barev reaguje BCA se sníženým (cuprous) kationtem, který byl vytvořen v prvním kroku. Intenzivní fialově zbarvený reakční produkt je výsledkem chelatace dvou molekul BCA s jedním měďnatým iontem., Komplex BCA / měď je rozpustný ve vodě a vykazuje silnou lineární absorpci při 562 nm se zvyšujícími se koncentracemi bílkovin. Komplex je přibližně 100krát citlivější (dolní hranice detekce) než bledě modrá barva první reakce.
reakce je silně ovlivněna čtyři aminokyselinové zbytky (cystein, cystin, tyrosin a tryptofan) v aminokyselinové sekvenci proteinu., Na rozdíl od metod vázání barviva Coomassie však univerzální peptidová páteř také přispívá k tvorbě barev, což pomáhá minimalizovat variabilitu způsobenou rozdíly v složení bílkovin.