descripción
Pierce BCA Protein Assay Kit es un ensayo de proteína de dos componentes, de alta precisión y compatible con detergentes para la determinación de la concentración de proteínas. Los reactivos Pierce BCA proporcionan una determinación precisa de la concentración de proteínas con la mayoría de los tipos de muestras encontrados en la investigación de proteínas. El ensayo Pierce BCA se puede utilizar para evaluar los rendimientos en lisados de células enteras, fracciones de columna de afinidad, muestras de proteínas purificadas, así como para monitorear la contaminación de proteínas en aplicaciones industriales., En comparación con la mayoría de los métodos de unión a colorantes, el ensayo de BCA se ve mucho menos afectado por las diferencias de composición de proteínas, lo que proporciona una mayor precisión de concentración.,—métodos de unión (Bradford)
• compatibilidad: no se ve afectada por las concentraciones típicas de la mayoría de los detergentes iónicos y no iónicos
• Tiempo de ensayo: 30 minutos de incubación; mucho más fácil y cuatro veces más rápido que los métodos clásicos de Lowry
• rango de ensayo: rango de trabajo lineal para BSA de 20 a 2000 µg/mL
• sensibilidad: detecte hasta 5 µg/mL con un protocolo mejorado
Cómo funciona el ensayo
el ensayo de proteína BCA combina la conocida reducción de Cu2+ a Cu1+ por proteína en un medio alcalino con la detección colorimétrica altamente sensible y selectiva del catión cuproso (CU1+) por ácido biciconínico (BCA)., El primer paso es la quelación del cobre con la proteína en un ambiente alcalino para formar un complejo azul claro. En esta reacción, conocida como reacción biuret, los péptidos que contienen tres o más residuos de aminoácidos forman un complejo Quelato coloreado con iones cúpricos en un ambiente alcalino que contiene tartrato de sodio y potasio.
en el segundo paso de la reacción de desarrollo de color, BCA reacciona con el catión reducido (cuproso) que se formó en el paso uno. El producto de reacción de color púrpura intenso resulta de la quelación de dos moléculas de BCA con un ion cuproso., El complejo BCA / cobre es soluble en agua y exhibe una fuerte absorbancia lineal a 562 nm con concentraciones crecientes de proteínas. El complejo es aproximadamente 100 veces más sensible (límite inferior de detección) que el color azul pálido de la primera reacción.la reacción está fuertemente influenciada por cuatro residuos de aminoácidos (cisteína, cistina, tirosina y triptófano) en la secuencia de aminoácidos de la proteína., Sin embargo, a diferencia de los métodos de unión de tinte de Coomassie, la columna vertebral del péptido universal también contribuye a la formación de color, ayudando a minimizar la variabilidad causada por las diferencias de composición de proteínas.