Kuvaus
Pierce BCA Protein Assay Kit on kaksi-komponenttinen, korkea-tarkkuus, pesuaine-yhteensopiva proteiinin määritys määritys proteiinin pitoisuus. Pierce BCA reagenssit tarjota tarkka määrittäminen proteiinin pitoisuus useimmat näyte tyyppejä kohdannut proteiini tutkimus. Pierce BCA-määrityksessä voidaan käyttää arvioimaan tuotot koko solujen lysaatit, affiniteetti-sarake jakeet, puhdistetut proteiinit näytteitä, sekä seurata proteiinia saastuminen teollisuuden sovelluksissa., Verrattuna useimmat väriaine-sitovia menetelmiä, BCA-määrityksessä on vaikuttanut paljon vähemmän proteiinia koostumusta erot, antaa suurempi keskittyminen tarkkuutta.,-sitovia menetelmiä (Bradford)
• Yhteensopivuus—vaikuta tyypilliset pitoisuudet kaikkein ioni-ja ionittomat pesuaineet
• Pitoisuus—aika-30 min inkubointi; paljon helpompaa ja neljä kertaa nopeammin kuin klassisen Lowry menetelmät
• Määritys-alue—lineaarinen mittausalue varten BSA 20-2000 µg/mL
• Herkkyys tunnistaa alas 5 µg/mL parannettu protokollan
Kuinka testi toimii
BCA Protein Assay yhdistyvät tunnettu vähentäminen Cu2+, jotta Cu1+ proteiini emäksisessä kanssa erittäin herkkä ja selektiivinen kolorimetrinen tunnistus kupari-kationi (Cu1+), jonka bicinchoninic acid (BCA)., Ensimmäinen vaihe on kuparin Kelaatio proteiinin kanssa emäksisessä ympäristössä muodostaen vaaleansinisen kompleksin. Tässä reaktiossa, joka tunnetaan biureetti reaktio, peptidejä sisältävät kolme tai useampi aminohappo jäämien muodossa värillinen kelaatti monimutkainen cupric ioneista emäksisessä ympäristössä, joka sisältää natrium kaliumtartraatti.
toisessa vaiheessa väri kehittäminen reaktio, BCA reagoi vähentynyt (kupari) kationi, joka oli muodostettu vaihe yksi. Voimakas purppuranvärinen reaktiotuote johtuu kahden BCA-molekyylin kelaatiosta yhdellä cuprous-ionilla., BCA / kupari-kompleksi on vesiliukoinen ja sillä on voimakas lineaarinen absorbanssi 562 nm: ssä proteiinipitoisuuksien kasvaessa. Kompleksi on noin 100 kertaa herkempi (havaitsemisen alaraja) kuin ensimmäisen reaktion vaaleansininen väri.
reaktio on voimakkaasti vaikuttanut neljä aminohappo jäämiä (kysteiini, kystiini, tyrosiini ja tryptofaani) aminohappo sekvenssin proteiinia., Kuitenkin, toisin kuin Coomassie-väriaine-sitovia menetelmiä, universal peptidi selkäranka vaikuttaa myös värin muodostumista, auttaa minimoida vaihtelun aiheuttama proteiinin koostumusta eroja.