Description
les RFLP sont des bandes qui correspondent à des fragments D’ADN, généralement compris entre 2 et 10 kb, résultant de la digestion de L’ADN génomique avec des enzymes de restriction. Les fragments D’ADN sont séparés par électrophorèse sur gel d’agarose et sont détectés par hybridation Southern blot ultérieure à une sonde d’ADN marquée. Le marquage de la sonde peut être effectué avec un isotope radioactif ou avec des taches non radioactives alternatives, telles que la digoxigénine ou la fluorescéine., Les sondes RFLP spécifiques au locus consistent en une séquence homologue d’une région chromosomique spécifique. Les sondes sont générées par la construction de bibliothèques d’ADN génomique ou complémentaire (ADNc) et peuvent donc être composées d’une séquence spécifique d’identité inconnue (ADN génomique) ou d’une partie de la séquence d’un gène fonctionnel (exons seulement, ADNc). Les sondes RFLP sont maintenues sous forme de clones dans des vecteurs bactériens appropriés qui permettent commodément l’isolement des fragments D’ADN qu’elles contiennent. Des sondes d’espèces apparentées peuvent être utilisées (sondes hétérologues)., La variation de séquence D’ADN affectant l’absence ou la présence de sites de reconnaissance des enzymes de restriction, ainsi que les insertions et les délétions dans deux sites de restriction adjacents, forment la base des polymorphismes de longueur.
Forces
les RFLP sont généralement modérément polymorphes. En plus de leur abondance génomique élevée et de leur distribution aléatoire, les RFLP présentent l’avantage de montrer des allèles codominants et d’avoir une reproductibilité élevée.,
faiblesses
les principaux inconvénients des RFLP sont l’exigence de procédures méthodologiques laborieuses et techniquement exigeantes, et des dépenses élevées. En général, si la recherche est menée avec des groupes d’espèces sauvages mal étudiés ou des cultures mal étudiées (cultures orphelines), des sondes appropriées peuvent ne pas encore être disponibles, de sorte que des investissements considérables sont nécessaires pour le développement. De plus, de grandes quantités d’ADN purifié de haut poids moléculaire sont nécessaires pour chaque digestion D’ADN. De plus grandes quantités sont nécessaires pour les espèces avec des génomes plus grands, et pour le plus grand nombre de fois nécessaire pour sonder chaque tache., Les RFLP ne se prêtent pas à l’automatisation et la collaboration entre les équipes de recherche nécessite la distribution de sondes.
Applications
les RFLP peuvent être appliquées dans des études de diversité et de phylogénétique allant d’individus au sein de populations ou d’espèces à des espèces étroitement apparentées. Les RFLP ont été largement utilisés dans les études de cartographie génétique en raison de leur abondance génomique élevée en raison de la disponibilité suffisante de différentes enzymes de restriction et de la distribution aléatoire dans tout le génome., Ils ont également été utilisés pour étudier les relations de taxons étroitement apparentés, comme outils de prise d’empreintes digitales, pour des études de diversité et pour des études d’hybridation et d’introgression, y compris des études du flux génétique entre les cultures et les mauvaises herbes.
bibliographie
Restriction fragment length polymorphism de la cartographie dans les conifères et les applications de la génétique forestière et l’amélioration des arbres Neale, D. B. et Williams, C. G. (1991). Revue canadienne de recherche forestière, 21: 545-554. doi: 10.1139 / x91-076.