descripción
los RFLP son bandas que corresponden a fragmentos de ADN, generalmente dentro del rango de 2-10 kb, que han resultado de la digestión del ADN genómico con enzimas de restricción. Los fragmentos de ADN se separan por electroforesis en gel de agarosa y se detectan por hibridación Southern blot posterior a una sonda de ADN marcada. El etiquetado de la sonda se puede realizar con un isótopo radiactivo o con tinciones alternativas no radiactivas, como digoxigenina o fluoresceína., Las sondas RFLP locus específicas consisten en una secuencia homóloga de una región cromosómica específica. Las sondas se generan a través de la construcción de bibliotecas de ADN genómico o complementario (ADNc) y, por lo tanto, pueden estar compuestas por una secuencia específica de identidad desconocida (ADN genómico) o parte de la secuencia de un gen funcional (solo exones, ADNc). Las sondas RFLP se mantienen como clones en vectores bacterianos adecuados que permiten convenientemente el aislamiento de los fragmentos de ADN que contienen. Se pueden utilizar sondas de especies relacionadas (sondas heterólogas)., La variación de la secuencia de ADN que afecta la ausencia o presencia de sitios de reconocimiento de enzimas de restricción, e inserciones y deleciones dentro de dos sitios de restricción adyacentes, forman la base de los polimorfismos de longitud.
concentraciones
generalmente se encuentra que los RFLPs son moderadamente polimórficos. Además de su alta abundancia genómica y su distribución aleatoria, los RFLPs tienen las ventajas de mostrar alelos codominantes y tener una alta reproducibilidad.,
debilidades
los principales inconvenientes de los RFLPs son la exigencia de procedimientos metodológicos laboriosos y técnicamente exigentes, y el alto gasto. En general, si la investigación se lleva a cabo con grupos poco estudiados de especies silvestres o cultivos poco estudiados (cultivos huérfanos), es posible que aún no se disponga de sondas adecuadas, por lo que se necesitan inversiones considerables para el desarrollo. Además, se requieren grandes cantidades de ADN purificado de alto peso molecular para cada digestión de ADN. Se necesitan cantidades más grandes para las especies con genomas más grandes, y para el mayor número de veces necesario para sondear cada mancha., Los RFLP no son susceptibles a la automatización y la colaboración entre equipos de investigación requiere la distribución de sondas.
aplicaciones
los RFLPs se pueden aplicar en estudios de diversidad y filogenética que van desde individuos dentro de poblaciones o especies, hasta especies estrechamente relacionadas. Los RFLPs han sido ampliamente utilizados en estudios de mapeo genético debido a su alta abundancia genómica debido a la amplia disponibilidad de diferentes enzimas de restricción y distribución aleatoria en todo el genoma., También se han utilizado para investigar relaciones de taxones estrechamente relacionados, como herramientas de huellas dactilares, para estudios de diversidad y para estudios de hibridación e introgresión, incluidos estudios de flujo genético entre cultivos y malas hierbas.
lectura sugerida
Restriction fragment length polymorphism mapping in conifers and applications to forest genetics and tree improvement Neale, D. B. and Williams, C. G. (1991). Canadian Journal of Forest Research, 21: 545-554. doi: 10.1139 / x91-076.