Kimutatása Pneumocystis jiroveci a Légúti Minták Négy Festési Módszerek

Pneumocystis jiroveci, korábbi nevén Pneumocystis carinii, továbbra is fontos, mert a tüdőgyulladás az immunhiányos betegek, bár a fertőzések ezzel az ügynök csökkent, miután a széles körben elterjedt használata rendkívül aktív retrovírus-ellenes kezelés (HAART) a humán immundeficiencia vírus (HIV) fertőzés (9, 12). Azok a betegek, akik a HIV-fertőzéstől eltérő okokból immunhiányos állapotban vannak, szintén veszélyeztetik a P. által okozott tüdőgyulladást., jiroveci, beleértve a hematológiai malignitásban szenvedő betegeket és azokat, akik immunszuppresszív szereket kaptak autoimmun betegségek kezelésére (2, 11, 12).

Bár számos nukleinsav-amplifikációs vizsgálatok, beleértve a valós idejű PCR vizsgálatok, fejlesztettek ki kimutatására P. jiroveci, ezek a vizsgálatok nem közhely a legtöbb klinikai mikrobiológiai laboratóriumok, illetve nem állnak rendelkezésre a kereskedelemben (3, 5). Ezért a fő laboratóriumi módszer kimutatására P., a jiroveci, egy olyan szervezet, amelyet nem lehet szokásos módszerekkel termeszteni, a klinikai minta közvetlen vizuális vizsgálata valamilyen festési módszer után (12). A klinikai mintákban a Pneumocystis kimutatására számos hisztokémiai foltot alkalmaztak. Ezek a hisztokémiai foltok közé tartozik a Diff-Quik, Grocott-Gomori methenamin ezüst (GMS), valamint a Calcofluor fehér foltok. A Diff-Quik folt a Wright stain (3) módosítása. A GMS folt egy ezüst csapadékfolt, amelyet általában a gombák megjelenítésére használnak szövettani szakaszokban (10)., Calcofluor fehér folt egy fluoreszkáló folt, az aktív összetevő, amely cellufluor, amely nonspecifically kötődik a béta-linked poliszacharidok, mint a kitin, illetve cellulóz, használt a közvetlen megjelenítés a gombák a klinikai minták (4). Immunfluoreszcens foltok, amelyek P. jiroveci elleni antitesteket alkalmaznak, szintén rendelkezésre állnak a szervezet közvetlen kimutatására klinikai mintákban (3, 5). Ezek a foltok hasonlóak a közvetlen és közvetett immunfluoreszcens foltok kimutatására használt vírusok klinikai példányok., Minden foltnak támogatói vannak; a HAART-korszak összehasonlító adatai korlátozottak.

ezért több intézményes értékelést végeztünk négy általánosan használt festési módszerről a P. jiroveci közvetlen kimutatására klinikai légzőszervi mintákban. A vizsgált légzőszervi példányokból származó diákat, amelyek többsége bronchoalveoláris mosási példányok voltak, citocentrifugálással készítették. A P. jiroveci vizsgálathoz benyújtott 313 légzőszervi példány ismételt kenetét megvizsgálták P. jiroveci jelenlétében a Calcofluor white (Fungifluor; Polysciences, Inc.,, Warington, Pa.), GMS, Diff-Quik (Baxter Scientific, McGraw Park, Ill.), és a Merifluor Pneumocystis (Meridian Bioscience, Inc., Cincinnati, Ohio). A csúszdákat a Merifluor Pneumocystis és Diff-Quik foltokkal festették a gyártó utasításai szerint. A Calcofluor fehér festés, 1 csepp Fungifluor volt hozzá, hogy minden egyes dia, a lefedő alkalmazták, így a reagens kiterjedt a teljes mintát tartalmazó területet, majd a dia hagyjuk, hogy üljön legalább 10 perc egy sötét páratartalom kamra szobahőmérsékleten előtt értelmezés egy fluoreszcens mikroszkóp., A GMS festés, a csúszdák voltak mikrózott 40 s egy 10% – os chromic savas oldat, mosni vízzel, majd elszámolt összeg 1% – os nátrium-metabiszulfit, 30 s. Miután a diák voltak desztillált vízzel le kell mosni, ők kerültek a Coplin jar tartalmazó 50.0 ml elégedett dolgozó a megoldást, mikrózott egy 65 s., A csúszdák voltak öblíteni újra desztillált vízzel, kezelt 1% arany-klorid 2 5 ok, öblíteni, desztillált víz, kitéve 5% – os nátrium-tioszulfát 1 min, counterstained egy világoszöld működő megoldás, tisztázták a xilol, fedett fedőlemezeket, megvizsgálták a rutin light microscopy.

a négy résztvevő intézmény mindegyik laboratóriuma elvégezte a különböző foltok egyikét, és az adott festési módszer alapján értelmezték értelmezéseiket., Az egyes intézmények egyéneinek volt tapasztalata az ott végzett festési módszerrel és a folt értelmezésével kapcsolatban. A példányok egyedi azonosító kódokat kaptak, és minden foltot önállóan vizsgáltak, anélkül, hogy ismernék az ugyanazon mintán egy másik festési módszerrel kapott eredményt., A mennyiség a minta ritkán volt elegendő, hogy mind a négy diák; 308 diák volt elérhető festés Calcofluor fehér, 310 diák volt elérhető festés Merifluor Pneumocystis, 307 diák volt elérhető festés Diff-Quik, valamint 310 diák volt elérhető festés GMS. Egyik esetben sem, ahol a dia nem volt elérhető, mivel nem elegendő mennyiségű minta tette a kategorizálás, hogy a minta, mint egy igazi pozitív vagy valódi negatív (lásd alább) függ az eredmény a hiányzó dia.,

az érzékenységet, specificitást, valamint a pozitív és negatív prediktív értékeket standard módszerekkel számították ki (1.táblázat). Az epicalc 2000 statisztikai szoftver segítségével összehasonlítottuk a párosított tesztek igaz-pozitív és hamis-pozitív eredményeinek arányát a chi-square teszttel (www.brixtonhealth.com/epicalc.html).

bár a Merifluor Pneumocystis folt több igaz-pozitív mintát észlelt, ez a szám nem különbözött szignifikánsan a Calcofluor white (P = 0, 260) és a GMS (P = 0, 343) foltoktól., Hasonlóképpen, a GMS és a Calcofluor fehér foltok által észlelt valódi pozitívumok száma nem különbözött szignifikánsan egymástól (P = 0, 838). A Diff-Quik folt által észlelt valódi pozitívumok száma azonban szignifikánsan kevesebb volt, mint a Merifluor Pneumocystis (P = 0, 002), a GMS (P = 0, 027), valamint a Calcofluor white (P = 0, 042) foltok. A hamis pozitívumok száma nem különbözött szignifikánsan a Calcofluor white, GMS és Diff-Quik foltok között (minden összehasonlítás p értéke >0, 05)., A Merifluor Pneumocystis folttal történő festés után jelentett hamis pozitívumok száma azonban szignifikánsan nagyobb volt, mint a GMS (P = 0, 004), A Calcofluor white (P = 0, 001) vagy a Diff-Quik (P = 0, 001) festése után.

bizonyos esetekben indukált köpetmintát lehet kapni a Pneumocystis jelenlétének értékelésére az e szervezet által feltételezhetően okozott tüdőgyulladásban szenvedő beteg diagnosztikai vizsgálatában (6)., Ha egy indukált köpetminta nem adja ki a tüdőgyulladás etiológiai ágensét, akkor a diagnosztikai anyag előállításához szükség lehet a bronchoalveoláris mosásból származó mintára, amely lényegesen költségesebb, és kis kockázatot hordoz a beteg számára., A Pneumocystis által okozott tüdőgyulladás vagy más mikroorganizmusok által okozott tüdőgyulladás kezelésének különbségei és a bronchoszkópia lehetséges szükségessége miatt, amely további költségeket és kockázatot jelent a beteg számára, abban az esetben, ha a diagnózist nem állapítják meg, fontos, hogy a lehető legjobb festési módszert alkalmazzák a szervezet kimutatására.,

ezenkívül különösen fontos az érzékeny és specifikus festési módszer fontossága a HAART korszakában, mivel a Pneumocystis által okozott tüdőgyulladás alacsonyabb prevalenciája hátrányosan befolyásolja minden olyan vizsgálat pozitív prediktív értékét, amelynek specifikussága kevesebb, mint 100% (9). Bár a Pneumocystis által okozott tüdőgyulladás prevalenciája eltér a HAART korszakban, mint a pre-HAART korszakban, a Pneumocystis kimutatására szolgáló optimális festési módszer kiválasztása fontos a fertőzés kockázatának kitett más immunhiányos állapotú betegek számára is., Valójában az optimális festési módszer kiválasztása fontosabb lehet a Pneumocystis kimutatása szempontjából a nem HIV-fertőzött, immunhiányos betegeknél, mivel kimutatták, hogy ezeknek a betegeknek a légzőszervi példányai kisebb terhet jelentenek a szervezetekben, mint a HIV-fertőzött, immunhiányos betegek (6).

tapasztalataink szerint a Diff-Quik folt nem volt hatékony eszköz a P. jiroveci jelenlétének szűrésére (azaz elsődleges festési módszer) a folt alacsony érzékenysége és negatív prediktív értéke miatt. Jelentősen több példány, amely P., jiroveci a Diff-Quik módszerrel hiányzott, mint a Calcofluor white, a Merifluor Pneumocystis és a GMS esetében. Raab et al. ismertesse mind az alacsony érzékenységet (68%), mind az alacsony specificitást (88%), amikor a diff-Quik foltot önmagában használták a Pneumocystis és más gombák kimutatására a bronchoalveoláris mosási mintákban (10). Ezek az eredmények azonban ellentétben állnak más csoportokéval, akik arról számoltak be, hogy a diff-Quik módszer hasonló volt a Pneumocystis kimutatására szolgáló GMS festési módszerhez (7, 8)., Az egyik csoport arról számolt be, hogy a Diff-Quik módszer érzékenyebb volt, mint a Calcofluor white, a közvetlen immunfluoreszcens festés, sőt a PCR, de ezeket az eredményeket nem erősítették meg (1).

ezzel szemben a Merifluor Pneumocystis folt volt a legérzékenyebb festési módszer, és képernyőként hasznosnak bizonyulhat a Pneumocystis jelenlétének kizárására, de ez volt a legkevésbé specifikus módszer ebben a vizsgálatban. Azonban a merifluor Pneumocystis folt hamis pozitív eredményeinek száma szignifikánsan nagyobb volt, mint a többi folt esetében., A Merifluor Pneumocystis folt pozitív prediktív értéke mindössze 81, 9% volt, összehasonlítva a másik három módszerrel, amelyek mindegyikének pozitív prediktív értéke meghaladta a 96% – ot. Ng et al. ezzel a festési módszerrel (8) nyilvánvaló hamis pozitív eredményeket is leírtak. Ezért azt javasoljuk, hogy ha a merifluor Pneumocystist elsődleges festési módszerként alkalmazzák egy klinikai mikrobiológiai laboratóriumban, akkor egy második módszerrel történő megerősítést kell végezni a végső vizsgálati eredmény specifikusságának és pozitív prediktív értékének növelése érdekében.,

mind a Calcofluor white, mind a GMS foltok érzékenysége köztes volt a Diff-Quik és a Merifluor Pneumocystis foltok között, de nagyon specifikusak voltak, 96% feletti pozitív prediktív értékekkel és 93% feletti negatív prediktív értékekkel rendelkeztek. Fraire et al. a Coccofluor white és a GMS foltokat is összehasonlíthatónak írták le a Pneumocystis kimutatására, 92,6% – os konkordanciával (4). Baughman et al., (1a) is leírja, az érzékenység, a közvetett immunofluorescent antitest folt, ami felé irányul Pneumocystis, illetve magasabb érzékenység képest módosított Wright stain egy GMS folt, de azt jelentette, egyetlen hamis pozitív eredményt, ezért sokkal nagyobb sajátossága, mint leírni. Lehetséges, hogy további gyakorlattal könnyebben felismerhetjük a patognomonikus formákat a Diff-Quik folttal, ezáltal növelve a vizsgálat érzékenységét., Hasonlóképpen, talán a Merifluor Pneumocystis folttal kapcsolatos további tapasztalatokkal meg lehet tanulni jobban megkülönböztetni a valódi-pozitív és a hamis-pozitív festést, ezáltal csökkentve a hamis-pozitív eredmények számát.

tapasztalataink szerint a Calcofluor white és a GMS foltok a legjobb paraméterekkel rendelkeznek a klinikai laboratóriumban történő rutinszerű alkalmazáshoz. Bár ezek a vizsgálatok kevésbé voltak érzékenyek, mint az immunfluoreszcens vizsgálatok, nagyon specifikusak voltak, és több mint elfogadható pozitív és negatív prediktív értékekkel rendelkeztek.,

• Copyright © 2004 American Society for Microbiology