leírás
Pierce BCA Protein Assay Kit egy kétkomponensű, nagy pontosságú, detergens-kompatibilis fehérje teszt meghatározására fehérje koncentráció. A Pierce BCA reagensek a fehérjekoncentráció pontos meghatározását biztosítják a legtöbb fehérjetípus esetében. A Pierce BCA teszt felhasználható a teljes sejt-lizátumok, az affinitás-oszlop frakciók, a tisztított fehérjeminták hozamának felmérésére, valamint az ipari alkalmazásokban a fehérjeszennyeződés megfigyelésére., A legtöbb festékkötési módszerhez képest a BCA-vizsgálatot sokkal kevésbé befolyásolják a fehérjeösszetétel-különbségek, nagyobb koncentrációs pontosságot biztosítva.,-kötelező módszerek (Bradford)
• Kompatibilitás—nem befolyásolja az átlagos koncentrációja a legtöbb ionos, mind a nem-ionos detergensek
• Assay idő—30-perc inkubáció; sokkal könnyebb, négyszer gyorsabb, mint a klasszikus Lowry módszer
• Assay tartomány lineáris működési tartomány a BSA 20 2000 µg/mL
• Érzékenység—detect 5 µg/mL fokozott jegyzőkönyv
Hogy a teszt működik,
A BCA Protein Assay egyesíti a jól ismert csökkentése, Cu2+, hogy Cu1+ által fehérje lúgos közeg, a rendkívül érzékeny, szelektív kolorimetriás kimutatása a cuprous kation (Cu1+) által bicinchoninic sav (BCA)., Az első lépés a réz kelátképződése fehérjével lúgos környezetben, hogy Világoskék komplexet képezzen. Ebben a reakcióban, amelyet biuret-reakciónak neveznek, három vagy több aminosav-maradékot tartalmazó peptidek színes kelát komplexet képeznek rézionokkal lúgos környezetben, nátrium-kálium-tartarátot tartalmazva.
a színfejlesztési reakció második lépésében a BCA reagál az első lépésben kialakult csökkentett (cuprous) kationnal. Az intenzív lila színű reakciótermék a BCA két molekulájának egy cuprous ionnal történő kelátképzéséből származik., A BCA / réz komplex vízben oldható, és erős lineáris abszorbanciát mutat 562 nm-en, növekvő fehérjekoncentrációval. A komplex körülbelül 100-szor érzékenyebb (az észlelés alsó határa), mint az első reakció halványkék színe.
a reakciót erősen befolyásolja négy aminosav-maradék (cisztein, cisztin, tirozin és triptofán) a fehérje aminosav-szekvenciájában., A Coomassie festékkötési módszerektől eltérően azonban az univerzális peptid gerinc is hozzájárul a színképződéshez, segítve a fehérje összetételi különbségei által okozott variabilitás minimalizálását.