Beskrivelse
Pierce BCA Protein Assay Kit er en to-komponent, høy presisjon, vaskemiddel-kompatibel protein analyse for bestemmelse av protein konsentrasjon. Pierce BCA reagenser gi nøyaktig bestemmelse av protein konsentrasjon med de fleste eksempel typer oppstått i protein forskning. Den Pierce BCA-analysen kan brukes til å vurdere avkastning i hele cellen lysates, tilhørighet-kolonnen fraksjoner, renset proteiner prøver, samt å overvåke protein forurensning i industrielle applikasjoner., Sammenlignet med de fleste dye-bindende metoder, BCA analysen er påvirket mye mindre av protein kompositoriske forskjeller, gir større konsentrasjon nøyaktighet.,-bindende metoder (Bradford)
• Kompatibilitet—upåvirket av typiske konsentrasjoner av de fleste ioniske og ikke-ioniske vaskemidler
• Analysen tid—30-min inkubasjon; mye enklere og fire ganger raskere enn klassisk Lowry metoder
• analyseområdet—lineær arbeidsområde for BSA av 20 til 2000 µg/mL
• Følsomhet—oppdage ned til 5 µg/mL med forbedret protokollen
Hvordan analysen fungerer
BCA Protein-Analysen kombinerer den kjente reduksjon av Cu2+ for å Cu1+ av protein i et alkalisk middel med den svært følsomme og selektiv pålitelig deteksjon av cuprous kation (Cu1+) av bicinchoninic syre (BCA)., Det første trinnet er chelation av kobber med protein i et alkalisk miljø for å danne en lys blå komplekse. I denne reaksjonen, kjent som biuret reaksjon, peptider som inneholder tre eller flere aminosyrer rester danner en farget chelate kompleks med cupric ioner i et alkalisk miljø som inneholder natrium, kalium tartrate.
I andre trinn av farge utvikling reaksjon, BCA reagerer med redusert (cuprous) kation som ble dannet i trinn én. Den intense lilla-farget reaksjon produktet resultatene fra chelation av to molekyler av BCA med en cuprous ion., Den BCA/kobber-kompleks er vannløselig og viser en sterk lineær absorbans ved 562 nm med å øke protein konsentrasjoner. Komplekset er ca 100 ganger mer følsom (nedre deteksjonsgrense) enn den lyseblå fargen på den første reaksjonen.
reaksjonen er sterkt påvirket av fire aminosyrer og reststoffer (cystein, cystine, tyrosin og tryptofan) i aminosyresekvens av protein., Imidlertid, i motsetning til Coomassie dye-bindende metoder, universal peptid ryggraden bidrar også til å farge dannelse, bidrar til å minimere variasjonen skyldes protein kompositoriske forskjeller.