beschrijving
Pierce BCA Protein Assay Kit is een twee componenten, hoge precisie, detergent-compatibele eiwit assay voor de bepaling van de eiwitconcentratie. De reagentia van Pierce BCA bieden nauwkeurige bepaling van eiwitconcentratie met de meeste steekproeven die in eiwitonderzoek worden aangetroffen. De analyse Pierce BCA kan worden gebruikt om opbrengsten in gehele cel lysaten, affiniteit-kolom fracties, gezuiverde proteã NEN steekproeven te beoordelen, evenals om eiwitverontreiniging in industriële toepassingen te controleren., In vergelijking met de meeste kleurstofbindende methoden, wordt de BCA-analyse veel minder beïnvloed door eiwit samenstellingsverschillen, die een grotere concentratienauwkeurigheid verstrekken.,—bindingsmethoden (Bradford)
• Compatibiliteit-niet beïnvloed door typische concentraties van de meeste Ionische en niet—ionische detergentia
• Assay time-30—min incubatie; veel gemakkelijker en vier keer sneller dan klassieke Lowry—methoden
• Assay range-linear working range for BSA of 20 to 2000 µg/mL
• Sensitivity-detecteer tot 5 µg/mL met enhanced protocol
Hoe de assay werkt
De BCA Protein Assay combineert de bekende reductie van Cu2+ tot Cu1+ door eiwit in een alkalisch medium met de zeer gevoelige en selectieve colorimetrische detectie van het cuprokation (CU1+) door bicinchoninezuur (BCA)., De eerste stap is de chelatie van koper met eiwit in een alkalische omgeving om een lichtblauw complex te vormen. In deze reactie, bekend als de biuret-reactie, vormen peptiden die drie of meer aminozuurresiduen bevatten een gekleurd chelaatcomplex met koperionen in een alkalisch milieu dat natriumkaliumtartraat bevat.
in de tweede stap van de kleurontwikkelingsreactie reageert BCA met het gereduceerde (cuprous) kation dat in stap één werd gevormd. Het intense paars-gekleurde reactieproduct is het resultaat van de chelatie van twee moleculen van BCA met één cupro-ion., Het BCA / kopercomplex is wateroplosbaar en vertoont een sterke lineaire absorptie bij 562 nm met toenemende eiwitconcentraties. Het complex is ongeveer 100 keer gevoeliger (onderste detectielimiet) dan de lichtblauwe kleur van de eerste reactie.de reactie wordt sterk beïnvloed door vier aminozuurresiduen (cysteïne, cystine, tyrosine en tryptofaan) in de aminozuursequentie van het eiwit., Nochtans, in tegenstelling tot coomassie dye-bindende methodes, draagt de universele peptide backbone ook tot kleurvorming bij, die helpen om veranderlijkheid te minimaliseren die door eiwit samenstellende verschillen wordt veroorzaakt.