Description
Pierce BCA Protein Assay Kit är en tvåkomponents, hög precision, detergent-kompatibel proteinanalys för bestämning av proteinkoncentration. Pierce BCA-reagenser ger noggrann bestämning av proteinkoncentration med de flesta Provtyper som uppstått i proteinforskning. Pierce BCA-analysen kan användas för att bedöma utbyten i hela celllysater, affinitetskolonnfraktioner, renade proteinprover samt för att övervaka proteinförorening i industriella applikationer., Jämfört med de flesta färgämnesbindningsmetoder påverkas BCA-analysen mycket mindre av proteinkompositionsskillnader, vilket ger större koncentrationsnoggrannhet.,—bindningsmetoder (Bradford)
• Kompatibilitet-opåverkad av typiska koncentrationer av de flesta joniska och icke—joniska tvättmedel
• Analystid-30—min inkubation; mycket enklare och fyra gånger snabbare än klassiska Lågormetoder
• Analysintervall—linjärt arbetsområde för BSA på 20 till 2000 µg/mL
• känslighet-detektera ner till 5 µg/mL med förbättrat protokoll
hur analysen fungerar
BCA-Proteinanalysen kombinerar den välkända minskningen av Cu2+ till Cu1+ med protein i ett alkaliskt medium med den mycket känsliga och selektiva kolorimetriska detekteringen av cuprous katjon (CU1+) av bicinkoninsyra (BCA)., Det första steget är chelation av koppar med protein i en alkalisk miljö för att bilda ett ljusblå komplex. I denna reaktion, känd som biuret-reaktionen, bildar peptider innehållande tre eller flera aminosyrarester ett färgat kelatkomplex med kopparjoner i en alkalisk miljö innehållande natriumkaliumtartrat.
i det andra steget i färgutvecklingsreaktionen reagerar BCA med den reducerade (cuprous) katjon som bildades i steg ett. Den intensiva lila-färgade reaktionsprodukten härrör från chelation av två molekyler av BCA med en cuprous Jon., BCA / kopparkomplexet är vattenlösligt och uppvisar en stark linjär absorption vid 562 nm med ökande proteinkoncentrationer. Komplexet är ungefär 100 gånger känsligare (nedre detektionsgräns) än den ljusblå färgen på den första reaktionen.
reaktionen påverkas starkt av fyra aminosyrarester (cystein, cystin, tyrosin och tryptofan) i proteinens aminosyrasekvens., Till skillnad från coomassie-färgbindningsmetoder bidrar den universella peptidbacken också till färgbildning, vilket bidrar till att minimera variabiliteten orsakad av proteinkompositionsskillnader.