beskrivelse
Pierce BCA Protein Assay Kit er en to-komponent, høj præcision, vaskemiddel-kompatibel protein assay til bestemmelse af proteinkoncentration. Pierce BCA-reagenser giver nøjagtig bestemmelse af proteinkoncentration med de fleste prøvetyper, der findes i proteinforskning. Pierce BCA-assayet kan anvendes til at vurdere udbytter i hele cellelysater, affinitetssøjlefraktioner, rensede proteinprøver samt til at overvåge proteinforurening i industrielle applikationer., Sammenlignet med de fleste farvestofbindingsmetoder påvirkes BCA-assayet meget mindre af proteinsammensætningsforskelle, hvilket giver større koncentrationsnøjagtighed.,-bindende metoder (Bradford)
• Kompatibilitet—upåvirket af typiske koncentrationer af de fleste ioniske og ikke-ioniske detergenter
• Analysen tid—30 minutters inkubation; meget lettere og fire gange hurtigere end den klassiske Lowry metoder
• Analysen udvalg—lineær arbejdsområde for BSA af 20 til 2000 mg/mL
• Følsomhed—registrere ned til 5 µg/mL med forbedret protokol
Hvordan analysen værker
BCA Protein Analysen kombinerer den velkendte reduktion af Cu2+ Cu1+ af protein i en alkalisk medium med en meget følsom og selektiv kolorimetrisk påvisning af kobberprodukter kation (Cu1+) ved bicinchoninic syre (BCA)., Det første trin er chelationen af kobber med protein i et alkalisk miljø for at danne et Lyseblå kompleks. I denne reaktion, kendt som biuret-reaktionen, danner peptider indeholdende tre eller flere aminosyrerester et farvet chelatkompleks med cupricioner i et alkalisk miljø indeholdende natriumkaliumtartrat.
i det andet trin i farveudviklingsreaktionen reagerer BCA med den reducerede (cuprous) kation, der blev dannet i trin et. Det intense lilla-farvede reaktionsprodukt er resultatet af chelationen af to molekyler af BCA med en cuprous ion., BCA / kobber komplekset er vandopløseligt og udviser en stærk lineær absorbans ved 562 nm med stigende proteinkoncentrationer. Komplekset er cirka 100 gange mere følsomt (nedre detektionsgrænse) end den lyseblå farve af den første reaktion.
reaktionen påvirkes stærkt af fire aminosyrerester (cystein, cystin, tyrosin og tryptophan) i proteinets aminosyresekvens., I modsætning til Coomassie-farvebindingsmetoder bidrager den universelle peptid-rygrad imidlertid også til farvedannelse, hvilket hjælper med at minimere variabilitet forårsaget af proteinsammensætningsforskelle.