Kuvaus
RFLPs ovat bändejä, jotka vastaavat DNA-fragmentteja, yleensä välillä 2-10 kb, jotka ovat johtuneet siitä, ruoansulatus genomista DNA: ta restriktioentsyymien. DNA-fragmentit erotetaan agaroosigeelielektroforeesilla, ja ne havaitaan myöhemmin eteläisellä blot-hybridisaatiolla merkityksi DNA-koettimeksi. Näytteenottimen merkinnät voidaan suorittaa radioaktiivisella isotoopilla tai vaihtoehtoisilla ei-radioaktiivisilla tahroilla, kuten digoksigeniinilla tai fluoreseiinilla., Locus erityisiä RFLP luotaimet koostuvat homologinen sarja tietyn kromosomi-alueella. Luotaimet ovat syntyneet rakentamalla genomista tai täydentäviä DNA (cDNA) kirjastot ja siksi voi koostua tietyssä järjestyksessä tuntematon identiteetti (genomista DNA: ta) tai osa-sekvenssin toiminnallisen geenin (eksonien vain, cDNA). RFLP-luotaimet säilyvät klooneina sopivissa bakteerivektoreissa, jotka mahdollistavat sopivasti pitämiensä DNA-sirpaleiden eristämisen. Sukulaislajeista voidaan käyttää luotaimia (heterologisia luotaimia)., DNA-sekvenssin vaihtelu vaikuttaa puuttuminen tai läsnäolo tunnustamista sivustoja rajoitus entsyymejä, ja lisäykset ja poistot kahden vierekkäisen rajoitus sivustoja, muodostavat perustan pituus polymorfismeja.
vahvuudet
RFLP: t ovat yleensä kohtalaisen polymorfisia. Lisäksi niiden korkea perimän runsautta ja niiden satunnainen jakelu, RFLPs on edut osoittaa codominant alleelia ja joilla on korkea toistettavuus.,
Heikkoudet
keskeiset epäkohdat RFLPs ovat vaatimus työlästä ja teknisesti vaativa metodologisia menettelyjä, ja korkea kustannuksella. Yleensä, jos tutkimus on suoritettu huonosti tutkittu ryhmiä luonnonvaraisten lajien tai huonosti tutkittu viljelykasvien (orpo kasveja), jotka soveltuvat anturit ei välttämättä ole vielä saatavilla, joten tarvitaan huomattavia investointeja kehittämiseen. Lisäksi jokaiseen DNA-ruoansulatukseen tarvitaan suuria määriä puhdistettua, suurimolekyylistä DNA: ta. Suurempia määriä tarvitaan lajeja suuremmat genomit, ja suuremman määrän kertoja tarvitaan koetin jokainen blot., RFLPs ei sovellu automaatioon ja tutkimusryhmien yhteistyö vaatii luotainten jakelua.
Sovellukset
RFLPs voidaan soveltaa monimuotoisuus-ja phylogenetic tutkimukset vaihtelevat yksilöiden sisällä populaatiot tai lajit, tiiviisti liittyviä lajeja. RFLPs on laajalti käytetty geeni kartoitus tutkimukset, koska niiden korkea genomin runsaus johtuu runsaasti saatavuus eri restriktioentsyymien ja satunnainen jakelu koko genomin., Heillä on myös käytetty tutkimaan suhteita läheisesti taksonien, kuten sormenjälkien työkaluja, monimuotoisuuden tutkimuksia, ja tutkimuksia hybridisaatio ja introgression, mukaan lukien tutkimukset geenivirta välillä kasveja ja rikkakasveja.
Suositeltavaa luettavaa
Rajoitus fragmentti pituuden polymorfismi kartoitus havupuut ja sovelluksia metsien genetiikan ja puu parannus Neale, D. B. ja Williams, C. G. (1991). Canadian Journal of Forest Research, 21: 545-554. doi: 10.1139 / x91-076.