leírás
az RFLPs olyan sávok, amelyek megfelelnek a DNS-fragmenseknek, általában 2-10 kb tartományon belül, amelyek a genomikus DNS restrikciós enzimekkel történő emésztéséből származtak. A DNS-fragmenseket agarózgél-elektroforézissel választjuk el, és a későbbi déli blot-hibridizációval egy jelzett DNS-szondával detektáljuk. A szonda címkézése radioaktív izotóppal vagy alternatív nem radioaktív foltokkal, például digoxigeninnel vagy fluoreszceinnel végezhető., A locus specifikus RFLP szondák egy adott kromoszómális régió homológ szekvenciájából állnak. Szonda által generált, az építési genomikai vagy komplementer DNS (cdns) könyvtárak, ezért lehet, amely egy meghatározott sorrendet ismeretlen identitás (genomiális DNS-t), vagy része a sorozat egy funkcionális gén (exons csak, cdns). Az RFLP szondákat klónokként tartják fenn a megfelelő bakteriális vektorokban, amelyek kényelmesen lehetővé teszik az általuk tartott DNS-fragmensek izolálását. Rokon fajokból származó szondák használhatók (heterológ szondák)., A DNS-szekvencia variációja, amely befolyásolja a restrikciós enzimek felismerési helyeinek hiányát vagy jelenlétét, valamint a két szomszédos restrikciós helyen lévő betoldások és törlések képezik a hossz polimorfizmusok alapját.
hatáserősségek
az RFLP-k általában mérsékelten polimorfak. A magas genomikai bőség és véletlenszerű eloszlásuk mellett az RFLP-k előnye, hogy a kodomináns allélokat mutatják, és nagy reprodukálhatósággal rendelkeznek.,
gyengeségek
az RFLP-k fő hátránya a fáradságos és műszakilag igényes módszertani eljárások követelménye, valamint a magas költségek. Általánosságban elmondható, hogy ha a kutatást rosszul tanulmányozott vadfajcsoportokkal vagy rosszul tanulmányozott növényekkel (árva növények) végzik, akkor még nem állnak rendelkezésre megfelelő szondák, ezért jelentős beruházásokra van szükség a fejlesztéshez. Ezenkívül nagy mennyiségű tisztított, nagy molekulatömegű DNS-re van szükség minden DNS-emésztéshez. Nagyobb mennyiségekre van szükség a nagyobb genomokkal rendelkező fajok esetében, valamint az egyes foltok vizsgálatához szükséges nagyobb számú alkalommal., Az RFLP-k nem alkalmasak az automatizálásra, a kutatócsoportok közötti együttműködés pedig szondák elosztását igényli.
Alkalmazások
az RFLPs alkalmazható Sokszínűségi és filogenetikai vizsgálatokban, a populációkon vagy fajokon belüli egyedektől a szorosan rokon fajokig. Az RFLP-ket széles körben alkalmazták a géntérképezési vizsgálatokban, mivel nagy genomi bőségük volt a különböző restrikciós enzimek bőséges rendelkezésre állása és a genom teljes véletlenszerű eloszlása miatt., Ezeket arra is felhasználták, hogy vizsgálják a szorosan kapcsolódó taxonok, mint ujjlenyomatvételi eszközök, a Sokszínűségi vizsgálatok, valamint a hibridizációs és introgressziós vizsgálatok, beleértve a növények és a gyomok közötti génáramlást.
javasolt olvasmány
restrikciós fragmentum hossza polimorfizmus leképezés tűlevelűek és alkalmazások forest genetics and tree improvement Neale, D. B. and Williams, C. G. (1991). Canadian Journal of Forest Research, 21: 545-554. doi: 10.1139 / x91-076.