Beskrivelse
RFLPs er band som svarer til DNA-fragmenter, vanligvis i størrelsesorden 2-10 kb, som har resultert fra fordøyelsen av genomisk DNA med restriksjon enzymer. DNA-fragmentene separeres ved hjelp av agarose gel elektroforese og blir oppdaget av påfølgende Southern blot hybridisering til en merket DNA-probe. Merking av sonde kan utføres med en radioaktiv isotop eller med alternative ikke-radioaktive forurensninger, for eksempel digoxigenin eller fluorescein., Locus spesifikk RFLP-prober består av et homologt sekvens av et bestemt kromosom-regionen. Prober er generert gjennom bygging av genomisk eller komplementære DNA (cDNA) biblioteker og kan derfor være sammensatt av en bestemt sekvens med ukjent identitet (genomisk DNA) eller en del av den sekvensen av et funksjonelt gen (exons bare, cDNA). RFLP-prober er opprettholdt som kloner i passende bakteriell vektorer som praktisk lar isolering av DNA-fragmenter som de holder. Sonder fra beslektede arter kan brukes (heterologous prober)., DNA-sekvens variasjon som påvirker fravær eller tilstedeværelse av anerkjennelse nettsteder begrensning av enzymer, og innsettinger og slettinger i to tilstøtende begrensning områder, danner grunnlag av lengde-polymorfismer.
Styrker
RFLPs er generelt funnet å være moderat polymorf. I tillegg til høy genom overflod og deres tilfeldig fordeling, RFLPs har fordeler av å vise codominant alleler og har høy reproduserbarhet.,
Svakheter
De viktigste ulempene med RFLPs er kravet om arbeidskrevende og teknisk krevende metodiske prosedyrer, og høy kostnad. Generelt, hvis forskningen er utført med dårlig studert grupper av ville arter eller dårlig studert avlinger (orphan avlinger) egnet prober kan ennå ikke tilgjengelig, slik at betydelige investeringer er nødvendig for utvikling. Videre, store mengder renset, høy molekylvekt DNA er nødvendig for hver DNA fordøyelsen. Større mengder er nødvendig for arter med større genomer, og for de større antall ganger nødvendig å undersøke hver blott., RFLPs er ikke mottagelig for automatisering og samarbeid mellom forskningsmiljøer krever distribusjon av prober.
Programmer
RFLPs kan brukes i mangfold og fylogenetisk studier alt fra enkeltpersoner innen bestander eller arter, til nært beslektede arter. RFLPs har vært mye brukt i genet kartlegging studier på grunn av sin høye genom overflod på grunn av god tilgjengelighet av ulike restriksjoner enzymer og tilfeldig distribusjon over hele genomet., De har også blitt brukt til å undersøke relasjoner nært knyttet taksa, som fingeravtrykk verktøy for mangfold studier, og for studier av hybridisering og introgression, herunder studier av gen flyt mellom avlinger og ugress.
Foreslått å lese
Restriction fragment length polymorphism kartlegging i bartrær og programmer til skog genetikk og trær forbedring Neale, D. B. og Williams, C. G. (1991). Canadian Journal of Forest Research, 21: 545-554. doi: 10.1139/x91-076.