beschrijving
RFLPs zijn banden die overeenkomen met DNA-fragmenten, gewoonlijk binnen het bereik van 2-10 kb, die het resultaat zijn van de vertering van genomisch DNA met restrictie-enzymen. De fragmenten van DNA worden gescheiden door agarose-gelelektroforese en door verdere Zuidelijke vlek kruising aan een geëtiketteerde sonde van DNA ontdekt. Etikettering van de sonde kan worden uitgevoerd met een radioactieve isotoop of met alternatieve niet-radioactieve vlekken, zoals digoxigenine of fluoresceïne., De locus-specifieke RFLP-sondes bestaan uit een homologe sequentie van een specifiek chromosomaal gebied. De sondes worden gegenereerd door de bouw van genomic of complementaire bibliotheken van DNA (cDNA) en kunnen daarom uit een specifieke opeenvolging van onbekende identiteit (genomic DNA) of een deel van de opeenvolging van een functioneel gen (exons slechts, cDNA) worden samengesteld. RFLP-sondes worden gehandhaafd als klonen in geschikte bacteriële vectoren die gemakshalve de isolatie van de fragmenten van DNA toestaan zij houden. Er kunnen sondes van verwante soorten worden gebruikt (heterologe sondes)., De opeenvolgingsvariatie van DNA die de afwezigheid of de aanwezigheid van erkenningsplaatsen van beperkingsenzymen beà nvloeden, en inserties en schrappingen binnen twee aangrenzende beperkingsplaatsen, vormen de basis van lengtepolymorfismen.
sterktes
RFLP ‘ s blijken over het algemeen matig polymorf te zijn. Naast hun hoge genomic overvloed en hun willekeurige distributie, hebben RFLPs de voordelen om codominant allelen te tonen en hoge reproduceerbaarheid te hebben.,
zwakke punten
de belangrijkste nadelen van RFLP ‘ s zijn de eis van omslachtige en technisch veeleisende methodologische procedures en hoge kosten. In het algemeen, als onderzoek wordt uitgevoerd met slecht bestudeerde groepen van wilde soorten of slecht bestudeerde gewassen (weesgewassen) geschikte sondes kunnen nog niet beschikbaar zijn, dus aanzienlijke investeringen nodig zijn voor de ontwikkeling. Bovendien zijn grote hoeveelheden gezuiverd DNA met een hoog molecuulgewicht vereist voor elke spijsvertering van DNA. De grotere hoeveelheden zijn nodig voor species met grotere genomen, en voor het grotere aantal tijden nodig om elke vlek te onderzoeken., RFLP ‘ s zijn niet vatbaar voor automatisering en samenwerking tussen onderzoeksteams vereist distributie van sondes.
toepassingen
RFLP ‘ s kunnen worden toegepast in diversiteits-en fylogenetische studies, variërend van individuen binnen populaties of soorten tot nauw verwante soorten. RFLPs zijn wijd gebruikt in de studies van het gen in kaart brengen wegens hun hoge genomic overvloed toe te schrijven aan de ruime beschikbaarheid van verschillende beperkingsenzymen en willekeurige distributie door het genoom., Zij zijn ook gebruikt om relaties van nauw verwante taxa te onderzoeken, als fingerprinting hulpmiddelen, voor diversiteitsstudies, en voor studies van kruising en introgressie, met inbegrip van studies van genstroom tussen gewassen en onkruid.
Suggested reading
Restriction fragment length polymorphism mapping in conifers and applications to forest genetics and tree improvement Neale, D. B. and Williams, C. G. (1991). Canadian Journal of Forest Research, 21: 545-554. doi: 10.1139 / x91-076.