Description
Pierce BCA Protein Assay Kit is a two-component, high-precision, detergent-compatible protein assay for determination of protein concentration. Os reagentes do Pierce BCA fornecem uma determinação precisa da concentração de proteínas com a maioria dos tipos de amostras encontrados na pesquisa de proteínas. O ensaio do Pierce BCA pode ser utilizado para avaliar os rendimentos em lisatos celulares inteiros, frações de afinidade-coluna, amostras de proteínas purificadas, bem como para monitorizar a contaminação de proteínas em aplicações industriais., Em comparação com a maioria dos métodos de ligação dos corantes, o ensaio BCA é muito menos afectado pelas diferenças de composição das proteínas, proporcionando maior precisão na concentração.,-métodos de ligação (Bradford)
• Compatibilidade afetada por concentrações típicas de mais iónicos e não iónicos detergentes
• Ensaio de tempo de 30 min de incubação; muito mais fácil e quatro vezes mais rápido do que o clássico métodos de Lowry
• o intervalo de Ensaio—linear faixa de trabalho para PREVENÇÃO de 20 a 2000 µg/mL
• Sensibilidade de detectar até 5 µg/mL com protocolo avançado
Como o ensaio obras
O BCA Protein Assay combina o conhecido redução de Cu2+ para Cu1+ por proteína em um meio alcalino, com o altamente sensível e seletivo detecção colorimétrica do cuproso de cátions (Cu1+) por bicinchoninic ácido (BCA)., O primeiro passo é a quelação do cobre com proteína em um ambiente alcalino para formar um complexo azul claro. Nesta reação, conhecida como a reação biuret, peptídeos contendo três ou mais resíduos de aminoácidos formam um complexo quelato colorido com íons cuprícos em um ambiente alcalino contendo tartarato de potássio sódico.In the second step of the color development reaction, BCA reacts with the reduced (cuprous) cation that was formed in step one. O intenso produto de reação de cor púrpura resulta da quelação de duas moléculas de BCA com um íon cuproso., O complexo BCA / cobre é solúvel em água e apresenta uma forte absorvância linear a 562 nm, com concentrações proteicas crescentes. O complexo é aproximadamente 100 vezes mais sensível (limite inferior de detecção) do que a cor azul pálido da primeira reação.
A reação é fortemente influenciada por quatro resíduos de aminoácidos (cisteína, cistina, tirosina e triptofano), na sequência de aminoácidos da proteína., No entanto, ao contrário dos métodos de ligação do corante Coomassie, a espinha dorsal do péptido universal também contribui para a formação de cores, ajudando a minimizar a variabilidade causada por diferenças de composição proteica.