beskrivning
RFLPs är band som motsvarar DNA-fragment, vanligtvis inom intervallet 2-10 kb, som har resulterat från uppslutning av genomiskt DNA med restriktionsenzymer. DNA-fragment separeras av agaros gelelektrofores och detekteras genom efterföljande Södra blot hybridisering till en märkt DNA-sond. Märkning av sonden kan utföras med en radioaktiv isotop eller med alternativa icke-radioaktiva fläckar, såsom digoxigenin eller fluorescein., Locus särskilda RFLP sonder består av en homolog sekvens av ett visst kromosomala regionen. Sonder genereras genom konstruktion av genomiska eller kompletterande DNA-bibliotek (cDNA) och kan därför bestå av en specifik sekvens av okänd identitet (genomiskt DNA) eller en del av sekvensen av en funktionell gen (endast exoner, cDNA). RFLP sonder upprätthålls som kloner i lämpliga bakteriella vektorer som bekvämt tillåter isolering av DNA-fragmenten de håller. Sonder från besläktade arter kan användas (heterologa sonder)., DNA-sekvensvariation som påverkar frånvaron eller närvaron av igenkänningsplatser för restriktionsenzymer, och Infogningar och deletioner inom två intilliggande restriktionsställen utgör grunden för Längd polymorfismer.
styrkor
RFLPs har i allmänhet visat sig vara måttligt polymorfa. Förutom deras höga genomiska överflöd och deras slumpmässiga fördelning har RFLPs fördelarna med att visa kodominanta alleler och ha hög reproducerbarhet.,
svagheter
de största nackdelarna med RFLPs är kravet på mödosamma och tekniskt krävande metodologiska förfaranden och höga kostnader. I allmänhet, om forskning utförs med dåligt studerade grupper av vilda arter eller dåligt studerade grödor (föräldralösa grödor) kan lämpliga sonder ännu inte vara tillgängliga, så stora investeringar behövs för utveckling. Dessutom krävs stora mängder renat DNA med hög molekylvikt för varje DNA-matsmältning. Större mängder behövs för arter med större genom, och för större antal gånger som behövs för att sondera varje blot., RFLPs är inte mottagliga för automatisering och samarbete mellan forskargrupper kräver distribution av sonder.
applikationer
RFLPs kan användas i mångfalds-och fylogenetiska studier som sträcker sig från individer inom populationer eller arter till närbesläktade arter. RFLPs har använts i stor utsträckning i genkartläggningsstudier på grund av deras höga genomiska överflöd på grund av den stora tillgången på olika begränsningsenzymer och slumpmässig fördelning genomet., De har också använts för att undersöka relationer av närbesläktade taxa, som fingeravtryck verktyg, för mångfaldsstudier, och för studier av hybridisering och introgression, inklusive studier av genflöde mellan grödor och ogräs.
föreslog läsning
begränsning fragment längd polymorfism kartläggning i barrträd och program för skog genetik och träd förbättring Neale, D. B. Och Williams, C. G. (1991). Canadian Journal of Forest Research, 21: 545-554. doi: 10.1139/x91-076.