Descrição
RFLPs são bandas que correspondem a fragmentos de DNA, geralmente dentro do intervalo de 2-10 kb, que resultaram da digestão de DNA genômico com enzimas de restrição. Fragmentos de DNA são separados por eletroforese em gel de agarose e são detectados por hibridização subsequente de blot Sul a uma sonda de DNA marcada. A rotulagem da sonda pode ser efectuada com um isótopo radioactivo ou com manchas não radioactivas alternativas, tais como a digoxigenina ou a fluoresceína., As sondas RFLP específicas do locus consistem numa sequência homóloga de uma região cromossómica específica. As sondas são geradas através da construção de bibliotecas de DNA genômico ou complementar (cDNA) e, portanto, podem ser compostas por uma sequência específica de Identidade Desconhecida (DNA genômico) ou parte da sequência de um gene funcional (apenas exons, cDNA). As sondas RFLP são mantidas como clones em vetores bacterianos adequados que convenientemente permitem o isolamento dos fragmentos de ADN que contêm. Podem ser utilizadas sondas de espécies relacionadas (sondas heterólogas)., A variação da sequência de DNA que afeta a ausência ou presença de locais de reconhecimento de enzimas de restrição, e inserções e deleções dentro de dois locais de restrição adjacentes, formam a base de polimorfismos de comprimento.
Strengths
RFLPs are generally found to be moderadamente polymorphic. Além de sua alta abundância genômica e sua distribuição aleatória, a RFLPs tem as vantagens de mostrar alelos codominantes e ter alta reprodutibilidade.,
fraquezas
as principais desvantagens dos RFLPs são a exigência de procedimentos metodológicos laboriosos e tecnicamente exigentes, e alto custo. Em geral, se a investigação for realizada com grupos de espécies selvagens mal estudados ou culturas mal estudadas (culturas órfãs), poderão ainda não estar disponíveis sondas adequadas, pelo que são necessários investimentos consideráveis para o desenvolvimento. Além disso, são necessárias grandes quantidades de ADN purificado de elevada massa molecular para cada digestão do ADN. Maiores quantidades são necessárias para espécies com genomas maiores, e para o maior número de vezes necessário para sondar cada mancha., A RFLPs não pode ser automatizada e a colaboração entre equipas de investigação exige a distribuição de sondas.aplicações RFLPs podem ser aplicadas na diversidade e estudos filogenéticos que variam de indivíduos dentro de populações ou espécies, a espécies estreitamente relacionadas. RFLPs têm sido amplamente utilizados em estudos de mapeamento de genes por causa de sua abundância genômica elevada devido à ampla disponibilidade de diferentes enzimas de restrição e distribuição aleatória em todo o genoma., Eles também têm sido usados para investigar relações de taxa intimamente relacionados, como ferramentas de impressão digital, para estudos de diversidade, e para estudos de hibridação e introgressão, incluindo estudos de fluxo genético entre culturas e ervas daninhas.
Suggested reading
Restriction fragment polymorphism mapping in conifers and applications to forest genetics and tree improvement Neale, D. B. and Williams, C. G. (1991). Canadian Journal of Forest Research, 21: 545-554. doi: 10.1139 / x91-076.